新品发布丨腺相关病毒（AAV）滴度检测试剂盒正式上市
随着国家药品监督管理局批准了一批 AAV 制剂的临床试验申请，越来越多的 AAV 制剂进入大众视野。AAV 制剂中病毒滴度的准确定量，是影响疗效的关键因素。因此建立准确、稳定的检测流程对于细胞和基因治疗企业来说尤为重要。数字 PCR 作为新一代的核酸定量工具，以其绝对定量与精准性高等特点，被细胞和基因治疗行业快速接纳并应用。
腺相关病毒（Adeno-associated virus，AAV）是一类单链线状 DNA 缺陷型病毒，需要辅助病毒（如腺病毒、单纯疱疹病毒、痘苗病毒）存在时，才能进行复制。在基因治疗的研究中，通常使用不需辅助病毒的重组 AAV 病毒（rAAV）将目的基因序列插入 rAAV 表达质粒中，包装病毒，然后直接使用 rAAV 感染细胞就能完成目的基因的插入操作。rAAV 作为基因疗法载体有以下优势：安全性高、免疫原性低；宿主细胞范围广；扩散能力强；体内表达基因时间长；适用种类多样等。
AAV 制剂的滴度检测是生物企业中重要的环节，稳定及精确的检测结果是临床给药的基础保障。根据现有的检测手段及原理，可以将其分为物理滴度及感染滴度两大类型。物理滴度主要是指病毒颗粒滴度及基因组滴度，感染滴度主要指目的基因的转导滴度。
物理滴度目前的主流方法是荧光定量法（qPCR），但 qPCR 往往由于其本身的技术原因，不同批次试剂中不同的标准曲线会影响其对最终浓度的计算，导致最终的滴度计算有所偏差。
达普生物提供一种更精准的检测方案 —— 微滴式数字 PCR，可以直接量化 DNA 拷贝数。这种方法具有以下特点：
1. 绝对定量：无需标准曲线，直接定量目的序列，减少实验复孔及标准曲线带来的额外操作和实验误差。
2. 更加准确：与 qPCR 相比，数字 PCR 可以消除不同 PCR 反应扩增效率的不同引入的定量偏差。
3. 更加精确：实验重复性好，实际样品测试结果 CV＜15%；且不受人为因素影响，在不同实验人员操作的情况下，结果均显示较小差异。
qPCR vs 数字 PCR
qPCR | 数字 PCR | |
定量能力 | 依赖标准曲线，相对定量 | 绝对定量 |
精准度 | 好 | 极佳 |
重复性 | 好 | 极佳 |
抑制剂耐受情况 | 一般 | 较好 |
数据分析 | 人工划定阈值 | 仪器自动分析 |
正是由于以上优点，美国药典章节 “US Pharmacopeia Standards for Cell and Gene Therapy” 中，对 AAV 制剂的滴度测定推荐了数字 PCR 方法用于替代 qPCR 方法。
为推动 AAV 病毒滴度更加精准定量，助力 AAV 制剂疗法的深入研究。达普生物基于星云数字 PCR 平台，自主设计开发了 “腺相关病毒（AAV）滴度检测试剂盒（数字PCR法）”。达普生物的星云数字 PCR 平台搭配本试剂盒，为客户提供从病毒制品准备到结果导出的完整解决方案，可应用于 AAV 生产制造中的质量控制。
达普生物-腺相关病毒（AAV）滴度检测试剂盒优势：
操作简便：无需标准曲线，试剂盒利用率高。
兼容性好：适合多种血清型检测。
优化流程：部分制品可使用免提取策略直接检测培养物中的病毒滴度。
线性关系展示
实验流程优势：数字 PCR vs qPCR
数字 PCR 实验排布
数字 PCR 定量检测无需标准曲线
● 低浓度重复性较好
qPCR 实验排布
qPCR 定量检测需要标准曲线
● 多批次，样品少的检测环境需要重复多次标准曲线
● 标准品需要稀释，操作要求较高，重复性（尤其是低浓度）欠佳
达普生物数字 PCR 系统软件合规性
为满足企业客户需求，达普生物数字 PCR 分析软件 - Astrolabe 合规版软件系统功能符合 FDA 21 CFR Part 11 法规，经检测保留的数据可作为检验后追溯的有效数据来源，确保生物医药企业生产、质控中数据记录的合规性。